Помимо сальмонелл – возбудителей брюшного тифа и паратифов А и В, описано более 2400 патогенных сероваров сальмонелл, вызывающих у человека острые гастроэнтериты, тифоподобные и септикопиемические формы заболевания, объединенных под названием сальмонеллез. Основными возбудителями сальмонеллеза являются Salmonella сероваров enteritidis, typhimurium, choleraesuis, haifa и т.д.
Бактериологический метод является ведущим методом в лабораторной диагностике сальмонеллеза (схема 10). Культуры сальмонелл чаще всего удается выделить из испражнений больных, несколько реже — из рвотных масс и промывных вод желудка, еще реже — из крови, мочи и желчи. Выделение сальмонелл из крови, костного мозга, спинномозговой жидкости, рвотных масс и промывных вод желудка подтверждает диагноз сальмонеллеза. У бактерионосителей сальмонеллы можно обнаружить в кале, моче, желчи.
Исследуемый материал засевают на чашки с висмут-сульфитным агаром и в среды накопления (магниевую, селенитовую), из которых через 6— 10 ч делают пересев на висмут-сульфит агар. Посевы выращивают при температуре 370 С, на второй день отбирают колонии черного цвета и пересевают на среду Олькеницкого (или Ресселя) для накопления чистой культуры. На 3-й день исследования выделенные чистые культуры пересевают в среды «пестрого» ряда и ставят РА с поливалентными и групповыми (А, В, С, Д, Е) адсорбированными сальмонеллезными сыворотками. Если получен положительный результат с одной из групп сывороток, проводят РА с адсорбированными О-сыворотками, характерными для данной группы, а затем с монорецепторными Н-сыворотками (неспецифической и специфической фазами) для определения серогруппы и серовара сальмонеллы в соответствии со схемой Кауфмана-Уайта.
На 4-й день исследования учитывают изменения сред «пестрого» ряда (табл. 10). Возбудители сальмонеллеза так же, как сальмонеллы паратифа В, не ферментируют лактозу и сахарозу, расщепляют глюкозу, маннит и мальтозу с образованием кислоты и газа, не образуют индола и (за небольшим исключением) выделяют сероводород.
Схема 10. Микробиологическая диагностика сальмонеллезов.
Биопроба. Материалом от больного производят пероральное заражение белых мышей, которые через 1-2 дня погибают от септицемии. При посеве крови из сердца и материала из внутренних органов выделяется культура сальмонелл.
Серологическое исследование — исследование с помощью РНГА парных сывороток крови больных, взятых с интервалом в 7-10 дней с сальмонеллезными поливалентными и групповыми (группы А, В, С, Д, Е) диагностикумами. Диагностическое значение имеет повышение титра антител в четыре и более раз.
Самостоятельная работа студентов
Изучить основные этапы бактериологического исследования метода диагностики сальмонеллёзов.
1. Учет посевов сальмонелл на среде Левина и Олькеницкого (демонстрация).
2. Контроль чистоты наделенной культуры сальмонелл (со среды Олькеницкого приготовлен мазок, окрашен его по Граму). Промикроскопировать и зарисовать демонстрационные микропрепараты возбудителей сальмонеллёзов S. enterica spp. enterica ser. enteritidis, typhimurium, choleraesuis. Возбудители сальмонеллёзов — идентичные по морфологии грамотрицательные палочки с закругленными концами.
3. Идентификация выделенной культуры возбудителя:
— по антигенным свойствам – учет ориентировочной реакции агглютинации на стекле с диагностическими монорецепторными сальмонеллезными агглютинирующими О- и Н сыворотками в соответствии со схемой Кауфмана-Уайта .
— по биохимическим свойствам — определение биохимической активности изучаемой культуры по пестрому ряду Гисса или Пешкова (демонстрация). Обратить внимание на расщепление глюкозы, отсутствие расщепления лактозы и сахарозы.
— по фаголизабельности (учет пробы с фагом — демонстрация)
4. Определение чувствительности выделенной культуры к антибиотикам методом бумажных дисков (демонстрация).
