Супероксидный анион-радикал образуется во всех аэробных клетках в процессе присоединения одного электрона к молекуле кислорода. Он является родоначальником других активных форм кислорода (Осипов А.И., Азизова О.А., Владимиров Ю.А., 1990). Образование ·О2— в ходе окисления питательных веществ при дыхании относится к так называемым паразитным процессам. При слабо кислых значениях рН образуется его протонированная форма НО2·. Образование этих АФК наиболее существенно вблизи цепей переноса электронов митохондрий, микросом, а в растительных клетках и хлоропластов. Считают, что образование ·О2— может происходить на двух участках микросомальной цепи – на цитохроме Р450 и на НАДФН-цитохром Р450 – оксидоредуктазе. В митохондриальной дыхательной цепи участком генерации ·О2— считается флавопротеид или цитохром b566.
Для фагоцита ·О2— — это «биологическое оружие», используемое в борьбе с патогенными бактериями. ·О2— и НО2·играют важную роль в защитных неспецифических иммунных механизмах организма: они выделяется в ходе активации при инфекционных воспалительных процессах фагоцитирующих клеток (нейтрофилы, макрофаги, моноциты, эозинофилы). Как отмечалось выше, специализированная энзиматическая система, генерирующая ·О2— , представляет собой комплекс НАДФН-оксидазы. Скорость образования ·О2— в этой системе ограничивается количеством НАДФН в клетке, которое, в свою очередь, зависит от активации гексозомонофосфатного шунта. ·О2— обладает слабо выраженными восстановительными свойствами (j = — 0,33 В) и может восстанавливать цитохром с и аскорбиновую кислоту.·О2— может прямо инактивировать адреналин и аскорбиновую кислоту, а НО2· реагирует с линолевой, линоленовой и арахидоновой кислотами, окисляя их до гидропероксидов. Образованию НО2·способствует закисление среды, он свободно проникает через мембрану, так как не несет заряда. При физиологических рН (7,4) количество НО2· — радикалов составляет 0,25% от количества ·О2—, однако в непосредственной близости к мембране или внутри фагосом рН может сильно отличаться в кислую сторону, что приводит к значительному повышению концентрации НО2·.
·О2— представляет большую опасность, поскольку он имеет большое время жизни и становится источником других АФК. Супероксидрадикал является высокореакционным соединением, которое вследствие высокой гидрофильности не может покидать клетку и накапливается в цитоплазме. Для проникновения ·О2— через мембрану необходимо наличие анионных каналов. Единственным примером такого канала является канал эритроцитарной мембраны. Превращения ·О2— приводят к образованию ряда активных окислителей (рис. 2). Он способен активировать NO-синтазу, которая образует в тканях NO-радикал, обладающий свойствами вторичного посредника (активирует растворимую гуанилатциклазу, продукт которой – цГМФ – проявляет вазодилататорные свойства). С другой стороны, супероксиданионрадикал способен снижать содержание NO- радикала, превращая его в пероксинитрит ONOOH (рис.2).
Для определения концентрации ·О2— используют методы электропарамагнитного резонанса (ЭПР-резонанс) и реакции окисления интенсивно поглощающих соединений: цитохрома С, нитросинего тетразолия, адреналина. Для доказательства специфичности этих реакций используют их подавление супероксиддисмутазой (СОД). Однако прямое наблюдение ·О2— представляет немалую трудность, так как спектрофотометрические наблюдения осложняются присутствием в биологических системах большого количества пигментов, экранирующих поглощение ·О2—. Значительно большей специфичностью обладает метод спиновых ловушек, который заключается в обнаружении спиновых аддуктов радикалов, образующихся при взаимодействии спиновой ловушки короткоживущего радикала, такого как ·О2—. Спектр ЭПР спинового аддукта зависит от структуры акцептированного радикала. Для определения ·О2— чаще используют косвенные методы, наблюдая за результатом его взаимодействия с соединениями, которые подвергаются окислению или восстановлению. Такими соединениями могут быть цитохром с, нитросиний тетразолий, тайрон, адреналин. Указанные методы обладают достаточной чувствительностью для обнаружения ·О2—, образуемых клеткой или субклеточными частицами. Однако восстановление цитохрома с, нитросинего тетразолия или окисление тайрона и других может происходить в реакциях без участия ·О2—. Поэтому реакция восстановления цитохрома с или нитросинего тетразолия может считаться обусловленной ·О2— в той мере, в какой она подавляется СОД (Осипов А.И., Азизова О.А., Владимиров Ю.А., 1990).
